Кілька ферментів, які зазвичай використовуються в експериментах ПЛР

Полімеразна ланцюгова реакція, скороченоПЛРанглійською мовою це метод молекулярної біології, який використовується для ампліфікації певних фрагментів ДНК.Це можна розглядати як особливу реплікацію ДНК поза організмом, яка може значно збільшити дуже невелику кількість ДНК.Протягом усьогоПЛРУ процесі реакції важливу роль відіграє один клас речовин – ферменти.

1. Taq ДНК

В дослідах на перших порах стПЛР, вчені використовували ДНК-полімеразу I Escherichia coli. Але з цим ферментом є проблема: йому потрібно поповнювати новий фермент кожного разу, коли виконується цикл, що робить етапи операції трохи складнішими, і його важко повністю автоматично посилити.Цю проблему вдалося вирішити після того, як у 1988 році вчені випадково виділили ДНК-полімеразу Taq з Thermus aquaticus. Відтоді автоматична ампліфікація ДНК стала реальністю.Відкриття цього ферменту також робитьПЛРтехніка зручна, практична та універсальна техніка.В даний час ДНК-полімераза Taq є найпоширенішою полімеразою в наборах ДНК.

2. ПфуДНК

Як згадувалося вище, ДНК-аза Taq має велику помилку, тому вчені певною мірою модифікували ДНК-полімеразу Taq, щоб уникнути неспецифічної ампліфікації через невідповідність, що призводить до неточних результатів тесту.Але модифікація Taq ДНК-полімерази може інгібувати активність ДНК-полімерази при кімнатній температурі.PfuДНК-полімераза цілком може компенсувати зазначені вище недоліки Taq ДНК-полімерази, так що реакція ПЛР може бути проведена нормально, і рівень успіху ампліфікації цільового гена може бути ефективно покращений.

3. Зворотна транскриптаза

Зворотна транскриптаза була відкрита в 1970 році. Цей фермент використовує РНК як матрицю, dNTP як субстрат, дотримується принципу спарювання основ і синтезує один ланцюг ДНК, комплементарний матриці РНК у напрямку 5'-3'.Зворотна транскриптаза в основному залежить від активності ДНК-полімерази з матриць ДНК або РНК і тому не має 3'-5' екзонуклеазної активності.Однак він має активність РНКази Н, яка певною мірою обмежує довжину синтезу зворотної транскриптази.Через низьку точність і термостабільність дикої зворотної транскриптази вчені також модифікували її.

дляПЛРексперименти, основними витратними матеріалами є: індивідуальна пробірка для ПЛР, пробірка для ПЛР на 4/8 стрипів, планшети для ПЛР.

ЛабіоВитратні матеріали для ПЛРмають наступнепереваги:

Пластини ПЛР: Широка сумісність термоциклера;Висока контрастність, легка ідентифікація свердловин;добре відображення флуоресценції; добретеплопередача;Сертифіковані інгібітори ДНКази, РНКази, ДНК, ПЛР та протестовані апірогени.

Індивідуальні пробірки для ПЛР: Стійкість до випаровування; добратеплопередача;чудова оптична прозорість; сертифіковані інгібітори ДНКази, РНКази, ДНК, ПЛР та протестовані апірогени.

4/8-стрипові пробірки для ПЛР: Ультратонкі стінки; висока чіткість; хороше відображення флуоресценції;може використовуватися у фармацевтичній промисловості, харчовій промисловості та молекулярній біології; високоякісний незайманий PP матеріал; сертифіковані інгібітори ДНКази, РНКази, ДНК, ПЛР та протестовані апірогени.